PCR扩增的反应条件:
  10×扩增缓冲液10ul;4种dNTP混合物 各200umol/L;引物 各10~100pmol;模板DNA 0.1~2ug;Taq DNA聚合酶 2.5u;Mg2+ 1.5mmol/L;加双或三蒸水至 100ul
  PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物延伸”三步反应的多次循环,使DNA片段在数量上呈指数增加。
  扩展资料:
  PCR扩增优点:
  一、高灵敏度
  PCR产物的产量呈指数级增长,pick(pg=10^-12g)的初始模板可以放大到微克(ug=10-6g)。在100万个细胞中可检测到1个靶细胞;在病毒检测中,PCR的灵敏度可达到3个RFU(斑块形成单位);在细菌学中,最低检测率为3个细菌。
  2、简单快捷
  采用耐高温的TAQ DNA聚合酶进行PCR反应。将反应液一次加入,在DNA扩增液和水浴上进行变性退火延伸反应。一般来说,扩增反应在2-4小时内完成。扩增产物一般采用电泳分析,不一定用同位素分析,无放射性污染,易于推广。
  三、样品的低纯度要求
  DNA粗产物和总RNA可用作扩增模板,无需分离病毒或细菌和培养细胞。从血液、体液、咳嗽液、头发、细胞和活组织等临床样本中直接检测到。